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DiD,DiO,DiI,DiR 和 DiS 細胞膜染料

時間:2017-12-21 15:59:27 瀏覽:

DiDDiODiIDiR DiS 細胞膜染料

產品描述:

DiDDiODiIDiRDiS染料是一族親脂性的熒光染料,可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。當與細胞膜結合后其熒光強度大大增強,這類染料有著很高的淬滅常數和激發態壽命。一旦對細胞染色,這類染料在整個細胞膜上擴散,最佳濃度時可以使整個細胞膜染色。它們的熒光顏色區分明顯:DiI(橙色熒光)DiO(綠色熒光)DiD(紅色熒光) DiR (深紅色熒光)這使得他們可以用來對活細胞進行多色成像和流式分析。DiIDiO可以分別用標準的 FITCTRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發,有著比DiI更長的激發波長和發射波長,在細胞和組織染色中更有價值。 DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織,在活體成像中用來示蹤。

     * Omega濾光器由Omega公司提供(www. omegafilters.com);Chroma濾光器由Chroma公司提供(www. chroma.com)

**DiR的發射波長肉眼不可見,所以需要配備CCD鏡頭或其他的近紅外檢測儀器。

使用方法:

1. DiDDiODiIDiRDiS細胞膜染色液制備

(1)配置DMSOEtOH 儲存液:儲存液用 DMSOEtOH配置濃度15 mM

注意:未使用的儲存液保存在-20 oC,避免反復凍融。

(2)工作液制備:用合適的緩沖液(如:無血清培養基,HBSSPBS)稀釋儲存液,配制濃度為15 μM的工作液。

注意:工作液的最終濃度是根據不同細胞和實驗的經驗來配制。可以從推薦濃度的十倍以上尋找最佳條件。

2. 懸浮細胞染色

(1)懸浮細胞密度為 1 × 106/mL加入到工作液中。

(2)37 ℃培養細胞 220分鐘,不同的細胞最佳培養時間不同。

(3)染色細胞試管在10001500轉離心5分鐘。

(4)傾倒上清液,再次緩慢加入預溫37℃的培養液。

(5)重復(3)(4)步驟兩次以上。

3. 粘壁細胞的染色

(1)使粘壁的細胞在無菌實驗室培養。

(2)從培養基中移走蓋玻片,吸走過量培養液,將蓋玻片放在潮濕的環境中。

(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

(4)37 ℃培養細胞 220分鐘,不同的細胞最佳培養時間不同。

(5)吸干染料工作液,用培養液洗蓋玻片23次,每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞,培養510分鐘,然后吸干培養基。

4. 顯微鏡檢測

(1)DiDDiODiIDiRDiS濾光器的選擇參見表1

(2)多色染料的同時檢測,濾光器按照以下設定:

a) DiIDiO=Omega XF52Chroma 51004;

b) DiIDiD=Omega XF92Chroma 51007;

c) DiIDiODiD=Omega XF93Chroma 61005

5. 流式細胞儀的檢測

DiDDiODiIDiRDiS 染色的細胞可以分別用經典的FL1FL2FL3FL4流式細胞儀檢測。

儲存條件:-20℃干燥避光保存,有效期一年。

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